過敏反應(yīng)是歐洲常見的疾病之一，據(jù)估計(jì)，超過1.5億歐洲人反復(fù)出現(xiàn)過敏反應(yīng)，到2025年，這一比例可能會(huì)增加到整個(gè)歐洲人口的一半。過敏反應(yīng)患者初會(huì)經(jīng)歷“致敏”，這意味著它們的免疫系統(tǒng)會(huì)發(fā)育出一類特定的抗體，即所謂的免疫球蛋白E抗體（IgE），它可以識(shí)別外部蛋白質(zhì)，稱為過敏原。 IgE與表達(dá)特定受體FcεR1的細(xì)胞結(jié)合并相互作用。體內(nèi)只有少數(shù)表達(dá)FcεR1受體的細(xì)胞類型，而重要的細(xì)胞可能是肥大細(xì)胞，這是在全身大多數(shù)組織中都能找到的一種免疫細(xì)胞。

當(dāng)再次暴露于過敏原時(shí)，肥大細(xì)胞（IgE與其FcεR1受體結(jié)合）立即通過迅速釋放引起經(jīng)典過敏反應(yīng)癥狀的不同介質(zhì)（例如組胺，蛋白酶或細(xì)胞因子）進(jìn)行反應(yīng)。這些癥狀取決于與過敏原發(fā)生接觸的組織，癥狀范圍包括打噴嚏/喘息（呼吸道）到腹瀉和腹痛（胃腸道）或瘙癢（皮膚）。全身接觸過敏原可以同時(shí)激活來自不同器官的大量肥大細(xì)胞，引起全身性過敏反應(yīng)。

盡管進(jìn)行了數(shù)十年的研究并且對(duì)IgE和肥大細(xì)胞在過敏中的關(guān)鍵作用有詳盡的了解，但是人們對(duì)這種“過敏現(xiàn)象”背后的生理學(xué)機(jī)制仍未*了解。 2006年， Stephen J. Galli及其在斯坦福大學(xué)的實(shí)驗(yàn)室揭示了肥大細(xì)胞對(duì)于先天抵抗某些蛇毒和蜜蜂的毒液的重要性。 Galli實(shí)驗(yàn)室的后續(xù)工作表明，“過敏反應(yīng)”在獲得性宿主防御高劑量毒液的防御中起著關(guān)鍵作用。

緊隨這一發(fā)現(xiàn)之后，維也納醫(yī)科大學(xué)和CeMM的高級(jí)博士后研究員Philipp Starkl，維也納醫(yī)科大學(xué)和CeMM PI的教授Sylvia Knapp以及斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Stephen J. Galli一起，及其同事著手研究此現(xiàn)象是否可能與防御其他產(chǎn)生毒素的生物，特別是病原細(xì)菌有關(guān)。作者選擇了金黃色葡萄球菌作為病原體模型，因?yàn)樗哂芯薮蟮呐R床意義和廣泛的毒素庫。該細(xì)菌是耐抗生素的原型病原體，并且還與哮喘和特應(yīng)性皮炎等疾病中過敏性免疫反應(yīng)的發(fā)展有關(guān)。

科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，患有輕度金黃色葡萄球菌皮膚感染的小鼠會(huì)產(chǎn)生適應(yīng)性免疫反應(yīng)和針對(duì)細(xì)菌成分的特異性IgE抗體。當(dāng)這些小鼠面臨嚴(yán)重的繼發(fā)性肺或皮膚和軟組織感染時(shí)，這種免疫反應(yīng)使它們具有更高的抵抗力。但是，缺乏功能性IgE效應(yīng)子機(jī)制或肥大細(xì)胞的小鼠無法建立這種保護(hù)。這些發(fā)現(xiàn)表明，針對(duì)細(xì)菌的“過敏”免疫反應(yīng)不是病理性的，而是保護(hù)性的。因此，防御產(chǎn)生毒素的病原細(xì)菌可能是過敏模塊的重要生物學(xué)功能。

支原體污染會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),狀態(tài)變差。部分細(xì)胞有支原體污染后仍能正常生長(zhǎng)，細(xì)胞與支原體長(zhǎng)期共存，但不明顯的支原體污染也會(huì)對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以理解，重復(fù)性差等問題。 本文締一生物為您分析細(xì)胞中支原體的祛除方法。

一、

Zell Shield®支原體祛除劑（培養(yǎng)基用）

英文名：Zell Shield®

品牌：德國(guó)MB

用途和用法：

1. 適用范圍

（1）細(xì)胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)（如已轉(zhuǎn)染或大量擴(kuò)增的細(xì)胞）。

（2）初始培養(yǎng)的原代細(xì)胞。

（3）存在支原體污染高風(fēng)險(xiǎn)的細(xì)胞。

2. 用法：

（1）1:100加入培養(yǎng)基。

（2）當(dāng)細(xì)胞存在支原體污染時(shí)，應(yīng)先對(duì)細(xì)胞懸浮沖洗三次，再用含Zell Shield®培養(yǎng)基培養(yǎng)。每次傳代前都應(yīng)做懸浮沖洗處理。連續(xù)傳代4次，支原體即可祛除。

二、

Mynox® Gold支原體祛除劑

（珍貴細(xì)胞保種用）

英文名：Mynox® Gold

品牌：德國(guó)MB

1. 適用范圍

被支原體污染的珍貴細(xì)胞或不易獲得的生物樣本（如細(xì)胞種子）。

2. 用法：

步驟1. 將「*治療液」加入到4.5ml培養(yǎng)基（FBS需≤5%）中，培養(yǎng)細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為104~105）。

步驟2. 細(xì)胞長(zhǎng)至80%-90%匯合時(shí)，細(xì)胞傳代。將1管「鞏固防護(hù)液」加到9.5ml培養(yǎng)基中，用該培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

步驟3. 重復(fù)步驟2，細(xì)胞再傳代2次，支原體即*祛除。

注意：每次傳代時(shí)，盡量都能把細(xì)胞懸浮沖洗三次，可取得更好的治療效果。

三、

Mynox支原體祛除劑

（珍貴樣本用）

英文名：Mynox®

品牌：德國(guó)MB

1. 適用范圍

被支原體污染的珍貴細(xì)胞、不易獲得的生物樣本或病毒收獲液（特別是不能長(zhǎng)期培養(yǎng)的樣品）。

2. 用法：

（1）對(duì)于貼壁細(xì)胞：

步驟1. 培養(yǎng)皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培養(yǎng)基中（FBS≤5%），混勻。

步驟2. 再加入2ml細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為104~105，培養(yǎng)基中的FBS需≤5%）。

步驟3. 細(xì)胞培養(yǎng)2小時(shí)，棄上清，換用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)4代即可。

（2）對(duì)于懸浮細(xì)胞：

步驟1. 在離心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶（0.125 %，5 mM EDTA in PBS），混勻。

步驟2. 加入1.6ml細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為104~105）。

步驟3. 室溫靜置30min。

步驟4. 600×g離心5min。棄上清，換用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)4代即可。