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新方法推動『DNA殘留檢測』進入新篇章

更新時間:2023-07-25  |  點擊率:640

在分子生物學領域中,準確測量DNA或RNA分子的數(shù)量是實驗的關鍵步驟。

傳統(tǒng)的PCR技術在這方面發(fā)揮了重要作用,但它存在著一些局限性。為了解決傳統(tǒng)PCR技術的限制,并提高分子檢測的準確性和靈敏度,數(shù)字PCR(dPCR)應運而生。

本文將追溯dPCR的發(fā)展歷程,探討其在分子生物學研究中的重要性與相關應用。


dPCR技術的起源

一般認為,早期的數(shù)字PCR可以追溯到20世紀90年代,當時研究人員使用微小的PCR反應體積來檢測單個分子。這種方法被稱為限制性酶消化PCR(RE-PCR),它使用限制性酶將DNA分子切成小片段,然后對這些小片段進行PCR擴增。

在二十世紀末,研究人員開始使用微流控技術來制造微小的反應體積。這種方法被稱為微滴數(shù)字PCR(ddPCR),它可以將單個DNA分子分隔成數(shù)百萬個微小的反應體積中。這種技術可以提高PCR反應的靈敏度和精確性,并且可以用于檢測罕見的突變和低拷貝數(shù)的DNA序列。


dPCR的原理與優(yōu)勢

dPCR是一種基于單分子級別的PCR擴增技術。與傳統(tǒng)的PCR相比,dPCR將反應混合物分割成更小的單元,使每個單元中只有一個分子。通過限定性稀釋,可以確定反應體系中的模板分子數(shù)。然后,利用熒光標記或探針技術檢測每個單元中是否存在目標序列,并計算目標分子的絕對數(shù)量。

dPCR的優(yōu)勢dPCR在許多方面優(yōu)于傳統(tǒng)PCR。首先,作為一種絕對定量的方法,dPCR能夠提供更高的靈敏度和準確性,尤其對于低豐度的目標分子。其次,由于每個單元都是獨立擴增和檢測的,因此dPCR對于抑制物的影響更小,結果更可靠。此外,dPCR還具有較寬的動態(tài)范圍和更好的檢測限度,能夠檢測罕見突變和微小的拷貝數(shù)變化。


?dPCR的應用

dPCR已廣泛應用于宿主細胞DNA殘留檢測、基因表達分析、突變檢測、病原體檢測和液體活檢等領域。在基因表達研究中,dPCR能夠準確測量不同基因的表達水平,并發(fā)現(xiàn)低豐度的轉錄變異。在突變檢測中,dPCR能夠檢測罕見突變,對于腫瘤早期診斷和治療選擇具有重要意義。在病原體檢測方面,dPCR的高靈敏度和準確性使其成為檢測感染病原體的理想工具。在液體活檢中,dPCR可以通過檢測循環(huán)腫瘤DNA來監(jiān)測腫瘤動態(tài)變化,為腫瘤的診斷和治療提供重要依據(jù)。

未來,dPCR可能會被更廣泛地應用于許多領域,包括醫(yī)學、生物學、環(huán)境科學和食品安全等。在醫(yī)學領域,dPCR可以用于檢測癌癥和其他疾病的DNA標記物,以及監(jiān)測藥物治療的效果;在環(huán)境科學領域,dPCR可以用于檢測水和土壤中的微生物和污染物。在食品安全領域,dPCR可以用于檢測食品中的病原體和污染物。


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