常規(guī)PCR Kit （經(jīng)典法）(不含Taq酶）

Venor® Gem Classic

常規(guī)PCR Kit（經(jīng)典法）(不含Taq酶）特點(diǎn)：

1.內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，僅一條陽性對(duì)照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。操作簡單，

易于觀察。

3. 高靈敏度，若PCR反應(yīng)體系加入10μl樣本，支原體檢測限度為≤5或≤10CFU。

(詳見下文“(2)Venor® Gem Classic Kit 10種常見支原體檢測限“)

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體，與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

5.試劑盒中不含Taq酶，可另外購買。推薦使用德國MB公司專用Taq酶。(貨號(hào): 53-1050)

Venor® Gem Classic Kit

10種常見支原體檢測限

常規(guī)PCR Kit（經(jīng)典法）(不含Taq酶）操作步驟：

第1步：樣本處理

a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說明：①樣品基質(zhì)可能會(huì)影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。

建議：樣本做DNA抽提處理，實(shí)現(xiàn)最高靈敏度。

推薦：德國MB公司生產(chǎn)的專用支原體DNA提取試劑盒，Venor® Gem Sample Preparation Kit。該DNA抽提試            劑盒已經(jīng)過廣泛驗(yàn)證。

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

第4步：啟動(dòng)PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對(duì)照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對(duì)照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對(duì)照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對(duì)照條帶會(huì)*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對(duì)PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ê完幮詫?duì)照相比），此時(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒，詳見第25頁），然后再檢測。

儲(chǔ)存條件

2~8℃至少6個(gè)月。復(fù)溶后在-18℃保存。

效期

1年6個(gè)月