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悄然的技術(shù)升級——凍干粉讓支原體檢測更穩(wěn)定、更靈敏

更新時間:2024-01-11  |  點擊率:597

隨著細(xì)胞治療等生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展,各國法規(guī)和相關(guān)機構(gòu),也逐步加強了,對生物制品安全性和可靠性的監(jiān)管。其中支原體檢測,是一個關(guān)鍵項目。在各國藥典中均指出,可以使用經(jīng)過方法學(xué)驗證的核酸法,可替代培養(yǎng)法和指示細(xì)胞法,對相關(guān)生物產(chǎn)品進行支原體檢測。因此,在進行支原體檢測實驗時,應(yīng)選擇通過方法學(xué)驗證的qPCR試劑盒,兼顧靈敏度和特異性,實現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的檢測。

 

如何實現(xiàn)檢測的高效與精準(zhǔn)

 

生物試劑,尤其是具有活性或功能的試劑,對于產(chǎn)品的劑型、儲存方法、運輸溫度都有比較高的要求。

 

劑型決定了產(chǎn)品本身是否穩(wěn)定,而穩(wěn)定性又進一步?jīng)Q定了產(chǎn)品儲存和運輸甚至是使用方法的難易程度。穩(wěn)定性越好的產(chǎn)品,對于儲存、運輸過程的溫度要求相對更簡單,操作難度小,產(chǎn)品則更易保留更大的活性,更容易實現(xiàn)高效且精準(zhǔn)的qPCR檢測結(jié)果。

 

qPCR液體試劑

 

用于方法驗證的支原體檢測試劑盒以qPCR法為主。目前,市場上大多數(shù)支原體檢測類的qPCR試劑盒,其試劑多以液體劑型為主。液體液試劑的特點

 

實際生產(chǎn)、運輸、使用過程中,液體試劑很容易發(fā)生失活的情況:

 

液體活性試劑需要-20℃儲存,在運輸過程中,為了保持溫度,往往需要干冰運輸,而干冰易揮發(fā),增加了運輸難度。在使用過程中,也需要先在冰上結(jié)凍,再使用,再次增加了反復(fù)凍融帶來的失活風(fēng)險。

 

qPCR凍干粉試劑

 

為了克服液體試劑的缺點,盡可能保留生物試劑的活性不因溫度的改變而被破壞,德國MB公司的qPCR檢測試劑盒,采用了新型的凍干粉劑型。

 

凍干粉試劑由于去除水分,可以更好地保持物質(zhì)活性,防止微生物生長、減緩氧化反應(yīng),相較于液體試劑更不容易失活,更適合長期保存、遠(yuǎn)距離運輸或高靈敏度的實驗。

 

穩(wěn)定性強:凍干粉試劑在制備過程中經(jīng)過冷凍和真空干燥處理,去除了水分,活性物質(zhì)處于“休眠狀態(tài)",進而有助于提高試劑的穩(wěn)定性。避免了液體試劑可能受到環(huán)境濕度、溫度等因素的影響,容易發(fā)生降解,從而影響實驗結(jié)果的缺點。

 

運輸條件相對簡單:因此相比于液體試劑,凍干粉試劑更適合長期存儲和運輸,對溫度的要求也寬松,4℃(冷鏈溫度:2-8℃)即可,減少了對冷凍設(shè)備的依賴,操作運輸簡便且容錯率高,避免了液體試劑保存過程中可能引起的失活可能性。

 

降低污染可能性,適合長期儲存和長時間運輸,結(jié)果更可靠:由于水分被去除,也減少了其中微生物生長繁殖的可能性,降低了試劑被微生物污染的風(fēng)險。因此,與液體試劑相比,凍干粉試劑更適合長期保存與運輸,進一步提高結(jié)果的可靠性。

 

降低氧化反應(yīng):水溶液的存在,容易促使一些氧化反應(yīng)的發(fā)生,從而導(dǎo)致試劑失活。凍干粉中的低水分含量有助于防止這些氧化反應(yīng)的發(fā)生,維持試劑的活性。

 

復(fù)溶后即可開始實驗,易于配制:凍干粉試劑的配制相對簡單,只需加入適量的溶劑即可重新溶解。這不僅減少了操作過程中的出錯可能性,還降低了試劑的使用成本。相比之下,液體試劑的配制可能需要更多的步驟,而且容易受到人為誤差的影響。此外,凍干粉試劑無需冷藏,便于儲存和運輸,為實驗室提供了更靈活的管理選擇。

 

綜上所述,相較于液體試劑,凍干粉試劑是qPCR實驗中更好的選擇,尤其是在支原體檢測方法驗證這類對于實驗靈敏度、特異性等方面有高要求的實驗中。然而,凍干粉試劑的制作,對于工藝的要求更高,需要保證試劑的活性不在制作過程中造成損失。市面上,德國Minerva Biolabs公司,專注于支原體qPCR凍干粉試劑(Venor Gem qEP)工藝,使用時復(fù)溶即可,盡可能保持試劑的更高活性,為支原體檢測提供更穩(wěn)定準(zhǔn)確的結(jié)果,完成高靈敏度、強特異性的方法驗證,遵循歐洲藥典流程要求,已幫助國內(nèi)外眾多項目通過方法學(xué)驗證。


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